核酸蛋白检测仪（自测试剂盒怎么用）

老铁们，大家好，相信还有很多朋友对于核酸蛋白检测仪和自测试剂盒怎么用的相关问题不太懂，没关系，今天就由我来为大家分享分享核酸蛋白检测仪以及自测试剂盒怎么用的问题，文章篇幅可能偏长，希望可以帮助到大家，下面一起来看看吧！

现在的实验室一般都配备些什么仪器，象学校和研究所

看你是什么样的学校和什么样的研究所了，看你要做什么样的实验和进行什么样的研究了。

常规仪器

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照　 度　 计紫外辐照计亮　 度　 计糖 　度 　计盐　 度　 计色差计 白度仪光泽度仪 灯箱雾　 度 　计浊　 度 　计旋 　光　 仪折　 光　 仪火焰光度计分光光度计显 　微 　镜光　 谱　 仪原子荧光光谱红外拉曼光谱直读光谱仪系测 　色 　仪熔　 点　 仪光 　度 　计色　 度　 仪傅里叶近红外生命科学

P C R 　仪凝胶成像系统化学(生物)光瓶口分配（液紫外检测仪振　 荡　 器均质机 细胞破超净工作台生物安全柜培 　养 　箱液　 氮　 罐酶 　标 　仪洗　 板　 机菌落计数器菌落分析仪高压灭菌器生化分析仪低温等离子灭血液保存箱药品保存箱疫苗保存箱低 温 冰 箱超低温冰箱深低温冰箱脉动真空灭菌人工气候箱恒温恒湿箱自动核酸蛋白梯度混合仪收 　集 　器蛋白检测仪紫外检测仪烤 　片 　机熔 　蜡 　机喷　 雾　 器细胞程控降温电泳仪 (槽)显微细胞电泳脉冲电泳系统电动喷雾器制　 冰　 机层 析 冷 柜连续分液器移 　液 　器滤　 白 　柜低温操作台微波合成反应发 　酵 　罐血细胞分析仪血球计数器尿 分 析 仪生化分析仪试　 验 　箱冻　 干 　机冷藏 / 冻箱实验室通风柜色谱质谱

高效液相色谱气 相 色 谱 色谱数据处理气相色谱仪器离子色谱 氨基全自动高纯度空气发生器氮、空气发生氮、氢、空气氢气发生器氮气发生器物理分析

粘 　度 　计水份测定仪量热/定硫/粒应力测定仪折 　射 　仪推 拉 力 计测 　温 　仪旋　 光　 仪糖 　度　 计绝缘测试器交 流 钳 表万 　用 　表风　 速　 计噪音剂量计高　 斯　 计数字式电容表钩 式 钩 表多功能校正器接地电阻计电磁波测试计温 湿 度 计网络缆线测试电池测试器气体测试计回路阻抗/预期瓦特功率计钩式电力计电源供应器转 　速 　计三相电力分析可挠性交流电印　 表　 机太阳能功率表微 欧 姆 表热 　指 　数湿　 度　 计记　 录 　仪流　 变　 仪盐 　度 　计色　 差　 计测 　汞 　仪土壤水分仪木材水分仪 多功能测量仪差压仪元素分析

电弧燃烧炉碳硫联测分析微机高速分析多元素分析仪高频红外碳硫管状红外碳硫电脑元素分析元素检测仪合金分析仪炉前快速碳硅铝合金测定仪电化学水质

酸度计 PH计电　导　度离子浓度计红外测油仪电位滴定仪比　色　计ORP测量仪测　氧　仪控　制　器溶　解　氧多功能测试仪PH酸碱度测试在线悬浮物分在线颗粒计数氨/一氯氨在线离 子 计需氧量分析仪水质采样器P H 电 极环境检测

汽车尾气检测CO2/CO/分析仪红外线气体分甲醛检测仪烟气分析仪CO/SO2/HCL/N采　样　器有毒害气体检报 警 装 置测　氡　仪噪音声级计振动测量仪器噪声自动监测声强测量分析电声测量仪器声学测量仪器环境测试仪COD监测仪氨氮自动监测氨氮自动监测CODCr监测仪食品粮油检测

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无转子硫化仪门尼粘度计橡胶冲击弹力橡胶密度计可塑性试验机平板硫化机纺织品检测

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闪点试验器粘　度　计水分试验器运动粘度测定蒸馏试验器针入度试验器石油试验器密度试验器腐蚀锈蚀试验硫含量试验器水溶性酸及碱润滑脂滴点试凝点试验器冰点试验器抗乳化性能试灰分试验器苯胺点试验器低温试验器残炭试验器自燃点测定仪空气释放值测电阻率测定仪石油蜡含油量盐含量试验器结晶点试验器界面张力测定分油试验器泡沫特性试验实际胶质试验硫醇硫测定仪脱气振荡仪喷射式清洗器萘结晶点试验色度测定器绝缘油耐压测蒸汽压试验器氧化安定性测机械杂质试验沥青软化点沥青蜡含量旋转薄膜烘箱标准粘度计沥青脆点试验石油沥青闪点泥浆测试器车辙试验仪击　实　仪混合料搅拌机延伸度试验器针　入　度抽　提　仪动 力 粘 度赛波特粘度试石 粉 含 量蒸馏试验器粘韧性测试仪压 力 老 化稳定度试验仪沥青含量测试乳 化 沥 青湿轮磨耗仪碾压试验仪粘结力试验器沥青化学组分密度试验器浮漂度试验器砂当量试验器旋转压实仪氧弹充氧器氧弹热量计测　斜　仪灌注桩孔径检井　斜　仪无损计量

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DNA实验室有哪些标准的仪器设备配置？

一般来说，需要一台高通量的基因分析仪，两台PCR扩增仪，一台纯水仪、一台DNA纯化仪，以及离心机、保温仪、振荡器、生物安全柜、移液器、冰箱等若干，您也可以根据实验室的大小和自己的需求增加别的仪器。建议您不太了解的话，可以先找CEIDI西递咨询一下，我们之前做实验室时这家公司给了我们很多专业的意见，挺靠谱的。

科学仪器有哪些

【生命科学】电泳仪/电泳槽 细胞样品收集器 自动部分收集器/自动样品采样仪 PCR扩增仪/PCR热循环仪 紫外检测仪/紫外分析仪 液氮生物容器(液氮罐) 冷冻干燥机(冻干机) 干式恒温器/恒温混匀仪 血红蛋白仪 核酸蛋白仪/酶标仪/生化分析仪 雪花制冰机 组织芯片制备仪/细胞程控降温仪 动物人工呼吸机/溶剂过滤器 层析柱 微波化学反应器 移液器/移液枪/分液器 微孔板恒温孵育器 氮气吹扫仪【光学仪器】可见分光光度计 紫外可见分光光度计 荧光分光光度计 红外分光光度计 原子吸收分光光度计 光泽度仪(计) 旋光仪/圆盘旋光仪 火焰光度计 白度测定仪(白度计) 测色仪/色差仪/罗维朋比色计 应力仪 熔点测定仪/熔点仪 照度计/日照计/测光仪 紫外辐照计 光度计/光强计/亮度计 光电雾度计/透光率雾度测定仪 阿贝折射仪/棱镜折射仪【箱类器材】真空干燥箱 鼓风干燥箱 电热恒温干燥箱 远红外干燥箱(烘箱) 胶片干燥箱 精密节能干燥箱 霉菌培养箱 振荡培养箱 隔水式培养箱 电热恒温培养箱 光照培养箱 生化培养箱 人工气候箱(培养箱) 恒温恒湿箱 高低温试验箱(湿热试验箱) 盐雾试验箱 二氧化碳培养箱(CO2) 植物培养箱/植物生长箱 老化试验箱 真空手套箱(惰性气体操作箱) 电热恒温水箱 高温烧结箱 定碳炉 低温冷阱/半导体冷阱【温控仪表】电热板/加热板/控温板 电热套/加热套/控温套 箱式电阻炉(马弗炉) 管式电阻炉/管式高温炉 坩埚电阻炉/坩埚电炉 单管定碳炉/双管定碳炉 封闭电炉/万用电炉 恒温水(油)浴/恒温水槽 恒温水浴锅 低温恒温槽/低温恒温浴 控温仪/温控仪/温度控制仪 电砂浴/电沙浴【无损检测】转速表/频闪仪 测振仪(振动监测仪/变送器) 机械故障检测仪/机械故障听诊器 地下管道/管线探测检漏仪 麦式真空计/压力真空计/热偶计/电阻计/复合计 泄漏检测仪 电火花检漏仪/电火花针孔检测仪 现场动平衡仪 洗片机/观片灯 超声探伤仪 磁粉探伤仪 X射线探伤机 其它无损检测设备 焊缝外观检测工具箱 表面粗糙度测量仪 红外测温仪 看谱镜(验钢镜) 黑白密度计 油质分析仪【量具量仪】数显卡尺 游标卡尺 带表卡尺 千分表/百分表 千分尺 高度尺/深度尺 数显万能角度尺 扭矩测量仪/扭力测试仪 卡表/卡规 数显标尺 管形测力计/管形拉力计/管形推力计 推拉测力计/拉压测力计/拉力计【除湿净化】除湿机/抽湿机/吸湿机 超声波清洗器 空气净化器 自动蒸馏水器/电热蒸馏水器 灭菌器/蒸汽消毒器 臭氧消毒机 超净工作台 消毒杀菌净手器 电动气溶胶喷雾器 纯水机/超纯水机 防潮柜/防潮箱/氮气柜 不锈钢存尸冷藏柜【常规设备】电动搅拌机 磁力搅拌器 研磨机/球磨机/沙磨机/平磨机 匀浆机/分散机/均质机/捣碎机 万能粉碎机/中药粉碎机/破碎机 锥形磨/胶体磨 恒温摇床/脱色摇床/摇瓶柜 振荡器/恒温振荡器 旋涡混合器/梯度混合器 空气压缩机/无油空压机 粉末压片机(油压机)/模具 切割机/镶嵌机 抛光机/预磨机/磨抛机 定时器/定时计 旋转蒸发器 层析实验冷柜 玻璃反应釜/真空恒温反应器【石化仪器】石油产品闪点和燃点试验器 石油产品恩氏粘度计 石油产品密度试验器 铜片/银片/润滑脂/液相腐蚀试验器 石油产品蒸馏(馏程)试验器 石油产品酸值/酸度试验器 石油产品灰分测定仪/色度测定仪 石油产品水分试验器 石油产品硫含量试验器 机械杂质/残留物/残炭/沉淀物测定仪 石油产品运动粘度测定器 倾点/浊点/冰点/凝点/冷滤点试验器 抗泡沫特性/抗乳化性能试验器 润滑脂滴点试验器 饱和蒸汽压试验器/实际胶质试验器 原油中蜡含量测定仪 氧化安定性测定仪 润滑油蒸发损失测定仪 液体石油采样器/取样器 绝缘油耐压测定仪 绝缘油体积电阻率测定仪 润滑油空气释放值测定仪 萘结晶点试验器/苯胺点试验器【药检仪器】切片机 澄明度检测仪 片剂多用测定仪(硬度.脆碎度.崩解度.溶出度) 药物光照试验仪 制丸机 细菌内毒素检查仪 药物透皮扩散试验仪 药物溶出度仪 片剂脆碎度测定仪 微机热原测温仪 崩解时限测定仪(崩解仪) 包衣机/小型包衣机【涂料仪器】涂料比重杯 漆膜附着力试验仪/划格试验仪 建筑涂料耐洗刷仪/磨耗仪 粒子细度试验仪(刮板细度计) 三辊机/平磨机 涂膜器/成膜器 干燥性能试验仪 柔韧性测试仪(杯突试验仪/弯曲试验仪/弹性试验器) 样品杂质分析仪 漆膜冲击试验机 目视比色箱/铁钻比色计

怎样去除蛋清中的鸡卵类粘蛋白?

下面的实验五可以：其余的可能对你也有用，遂没删

实验一多酚氧化酶（PPO）的分离提取

一、原理与目的

多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，是组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应，因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。

PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌，邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成，色素分子量愈高，颜色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。

本实验将采用马铃薯为主要材料，通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。

通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、材料与试剂

（1）马铃薯（大约每小组100-200g）

（2）试剂：

0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001MEDTA，0.005MgCL2）配置时配

（3）实验器械与仪器设备：

试管与试管架；烧杯、玻璃搅棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；

过滤纱布；植物组织匀浆器；pH计和pH试纸；GL-20C高速冷冻离心机；

DL-7A大容量低速冷冻离心机

三、操作步骤

1：粗酶提取：

水果肉组织按1：1（W/V）比例与003M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆4层后纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。

2：盐析分级沉淀：

在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），再以6000rpm离心20min，弃除上清夜，收集粗酶沉淀。

四、实验结果

获得PPO粗酶液。

实验二 PPO粗酶液的纯化

一、原理

1.葡聚糖凝胶Sephadex G-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。（G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质）

2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳离子的蛋白质，在层析时会吸附在柱材料上，而杂蛋白会洗下。后用NaCl梯度洗脱PPO，（NaCl为强离子交换剂，能将弱吸附在柱材料上的PPO置换下来）。粗酶液从而得到纯化。

二、材料与试剂

试剂：0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)配制时配×10倍浓缩液1000ml;NaCL;聚已二醇；DEAE-纤维素DE52；葡聚糖凝胶Sephadex G-200;兰葡萄糖－40、70、100等；

实验器械与仪器设备：试管与试管架、烧杯、玻璃搅棒、移液管、滴管等；试剂瓶、层析柱、pH计和pH试纸、恒流泵、梯度混合仪、核酸蛋白监测仪、GL-20C高速冷冻离心机、DL-7A大容量低速冷冻离心机

三、操作步骤

1．葡聚糖凝胶的处理、装柱及平衡

（1）柱材处理

称取一定量的Sephadex G-200干粉，加无离子水或蒸馏水浸泡溶胀48h,去掉悬浮的细微颗粒，为防止凝胶颗粒中的空气存在，影响层析效果，凝胶装柱前一定要将凝胶液中的气体除掉，其办法是将凝胶液放进抽滤瓶中，进行抽真空处理，直到凝胶液中没有气泡出现为止。

（2）装柱

将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的凝胶液（凝胶的浓度过高会产生气泡，影响蛋白质分离速度，浓度过低易产生凝胶分层，影响蛋白质的分离效果）轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降在层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5-2cm处，停止装柱，剪一与柱内径相等的滤纸片覆盖于凝胶上。层析柱上端进液口连接恒流泵，下出液口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。

（3）平衡

在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。在本实验中，用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA)，平衡Sephadex G-200凝胶。

2．上样：将粗酶液上柱。

3．洗脱：用0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4（内含0.001M EDTA）洗脱，收集洗脱液进行酶活性、蛋白质浓度、聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量的基本性质分析测定。

4．DEAE－纤维素的处理及装柱

（1）处理

本实验采用的是DEAE－纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。

（2）装柱

将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。

（3）平衡

在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。在本实验中，用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA)，预先将DE-52柱进行平衡。

5．上样：

将洗脱酶液上样，用0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4（内含0.001M EDTA）洗脱杂蛋白。

6．洗脱：

用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M Tris-HCL缓冲液pH7.4(内含0.001M EDTA)进行梯度洗脱。

7．测定酶活性和蛋白质浓度

实验三 PPO活性测定

一、原理与方法

PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。

其方法是：在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液试管中加入0.05ml0.05M邻苯二酚溶液，在30℃恒温水浴中预热后加入0.05ml酶液，反应5分钟，在分光光度计410nm处读取吸光值。在上述条件下，以A410读数，以每分钟增加0.01O.D.值定义为一个酶活性单位（U）。

二、仪器与试剂

（1）样品：

多酚氧化酶粗酶液

硫酸铵沉淀组分

DE-52洗脱组分

葡聚糖凝胶洗脱组分

（2）底物：

邻苯二酚：O.01M邻苯二酚溶液

（3）反应体系：

0.2M邻酸二氢钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8

（4）器皿与仪器：

试管、恒温水浴等

分光光度计

三、酶蛋白的比活性

比活性＝酶活单位（U）/mg蛋白质

四、实验结果与分析

1. Sephadex G-200的洗脱组分的相对浓度（OD590）和相对酶活（OD410）

结果列表

试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.16 0.09

粗酶液 0.20 0.14 4 0.03 0.03

1 0.00 0.01 5 0.03 0.01

2 0.13 0.09 6 0.02 0.02

分析:2和3试管中含绝大部分所需蛋白,保存进行下一步纯化。

2. DE-52的洗脱组分的相对浓度（OD590）和相对酶活（OD410）

结果列表

试管号 蛋白质浓度 PPO酶活 试管号 蛋白质浓度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.03 0.05

粗酶液 0.22 0.16 4 0.09 0.05

1 0.00 0.00 5 0.07 0.02

2 0.03 0.02 6 0.03 0.00

分析:酶活性高低不一定与蛋白含量高低成正比,3和4试管中含较多所需蛋白。

实验四胰酶分离提取

一、原理与目的

提取制备酶的经典方法，多采用硫酸铵分级沉淀，胰酶在75%饱和度硫酸铵中沉淀，其它杂蛋白一般在10%硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取，最后在PH8.0硼酸缓冲液中得到结晶。

胰酶在PH3.0时最稳定，可在低温下储存较长的时间而不失活；低与此PH酶易变性；高于PH5时，酶易自溶而失活。因此提取制备胰酶的全部操作过程应在低温和低PH下进行。胰酶以无活性的酶原形式存在于动物的胰脏中。胰蛋白酶原在正常生理条件下可被肠激酶和钙离子所激活或自我环化成为有活性的酶。猪胰蛋白酶原分子量约24000－25000，而猪胰酶分子量为23400。在酶原活化的过程中，酶原N端Lys与Ile之间的一个肽链被断裂，丢失一个6肽，分子构象发生改变，PI变成10.8。

本实验拟通过从猪胰脏中制备胰酶结晶实验，掌握酶的制备、一般分离、提取、纯化和结晶的操作技术。同时为亲和层析、免疫学实验准备实验样品。

二、材料与试剂

1．仪器

紫外光分光光度计、恒温水浴、离心机、组织捣碎机、PH计、显微镜、秒表、剪刀、镊子、搪瓷盆、乳钵、大玻璃漏斗、抽滤瓶，塑料小桶、纱布、PH试纸，滤纸、玻璃器皿等。

2．材料：新鲜猪胰脏

3．试剂及溶液配制

pH2.5乙酸酸化水、2.5M H2SO4溶液、2M.NaOH溶液、5M NaOH溶液、01M HCL溶液、0.025M HCL溶液、0.01M HCL溶液、0.4M pH9.0硼酸缓冲液（母液为0.8M，用时稀释一倍）、Tris、硫酸铵。

0.8M pH9.0硼酸缓冲液：取20ml0.8M四硼酸钠溶液，混合后用PH计校正。

三、操作步骤

1．胰蛋白酶原的提取与分离：

（1）称取1－1.5Kg新鲜猪胰脏，在冰浴下剥除脂肪和结缔组织，在低温下用绞肉机绞碎胰脏（或用高速组织匀浆机捣碎）加1－2倍体积以预冷却的PH2.5-3.0乙酸酸化水溶液提取（按1g组织相当于1ml体积计算，以此类推）。检查提取液中PH，若高于PH3.0时应及时用10％乙酸调节，使提取液维持PH2.5－3.0之间。在冷室5℃左右搅拌提取18－24h，而后用4层纱布过滤，尽量拧挤出滤液，滤液呈乳白色，用约300mlpH2.5乙酸酸化水再提取残渣一次（时间约为1－2h），合并滤液，此时滤液PH值较高，可用5M H2PO4溶液调整PH至2.5－3.0，放置 3－5h后，浑浊滤液冷却后，用玻璃漏斗进行自然过滤，滤液呈黄色透明液体，收集滤液，量其总体积，弃去沉淀物。

(2)盐析：滤液加固体粉状硫酸铵进行盐析，使溶液至75％饱和度。盐析溶液放冷室中过夜，次日用4000r/min离心机离心，或用布氏漏斗抽滤，滤饼经压干后称重，可得约20g胰蛋白酶原粗制品。

（3）胰蛋白酶原得激活：将胰蛋白酶原粗制品用10倍体积得冷蒸馏水，分多次加入使滤饼溶解，溶液呈乳白色，量其体积，取出1ml溶液用于测定，溶液中硫酸铵得含量（约为滤饼重得1/4）。因为硫酸铵可以与活化剂钙离子结合，生成硫酸钙，如果钙离子过少会直接影响胰酶原的激活过程，按浓度量计算，将已研细的固体CaCL2慢慢加入酶原溶液中，边加边搅拌均匀。用5MNaOH溶液调PH至8.0。在酶溶液加入约5mg结晶猪胰蛋白酶，轻轻搅拌均匀，置5℃冰箱中使酶原活化。

（4）纯化：去除杂蛋白，量取胰蛋白酶溶液体积后，用5M硫酸溶液调节滤液PH至2.5－3.0，抽滤除去硫酸钙沉淀，滤液体积约1000ml，加入已经研细的硫酸铵粉末，使其溶液达40％饱和度（每升滤液加242g硫酸铵）。放置5℃冰箱中5－8h,抽滤除去沉淀。

实验五卵清蛋白分离提取

一、实验目的与原理

鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中，对胰蛋白酶有强烈的抑制作用，高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1。鸡卵粘蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的，而在碱性溶液中较不稳定。

由于鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶有强烈的抑制作用，因此可以用鸡卵粘蛋白做亲和配基配制纯化胰酶的亲和材料。

二、材料与试剂：

1．材料：新鲜鸡蛋2只

2：仪器：抽滤瓶500－1000ml、烧结漏斗、移液器、磁力搅拌器

3：试剂：

10％TCA，用固体NaOH调调PH至1.05－1.10，需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、胰蛋白酶液、BAEE-0.05M，PH8.0Tris-HCL缓冲液（每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2），50ml

pH8.0,0.1M Tris-HCL缓冲液

三、操作步骤

1，取两只新鲜鸡蛋，得蛋清50ml，置于烧杯中，外用温水浴25℃－30℃，在不断搅拌条件下，缓慢加入等体积得三氯乙酸－丙酮（1:2V/V），立即出现大量白色絮状沉淀，加完后最终PH约3.5，再继续搅拌30min，然后在4℃冰箱中放置过夜。

2,次日用布氏漏斗抽滤，得黄绿色清液。

3，边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白，在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收，下部沉淀部分于4000rpm离心5min，收集沉淀。

4，将沉淀溶于10ml无离子水中，对无离子水（50倍）透析4h，换水两次，再对碳酸钠缓冲液透析过夜，4000rpm离心10min ,去除不溶物。

实验六亲和层析纯化胰酶

一、实验目的与原理

生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间，抗原与抗体之间，结合的双方不仅是专一的，而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性，如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不溶的固体载体上作为固定相，那么另一方随着流动相流经该固定相的时候，双方便亲和结合为一个整体。然后只有改变某种物理条件或化学条件使结合的双方解离，即能得到于固定相有特异亲和力的某一特定物质。这种利用生物分子和相对应分子之间亲和结合和解离性质而建立起来的层析方法称之为亲和层析。

本实验通过将胰蛋白酶抑制剂－鸡卵粘蛋白与Sephadex-G75偶联及亲和层析纯化胰酶的操作，以了解亲和层析的基本原理，掌握亲和柱材活化偶联及亲和层析操作的基本过程和技术。

二、仪器与试剂

1.鸡卵粘蛋白制备

2．Sephadex-G75的活化和偶联

2．5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75 、0.05M NaCL溶液 50ml、纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg、 5% K2CO3、0.27gKBH4 （溶于20ml水）

3．亲和层析

0.1M Tris-HCL pH7.5(含0.5M KCL,0.05M CaCL2) 200ml、粗胰蛋白酶约50ml 、0.1N甲酸钾、0.5M KCL pH2.5 100ml

仪器器材：抽滤瓶500－1000ml、层析柱、紫外分光光度计、紫外蛋白检测仪、烧杯漏斗、移液管、磁力搅拌器

三、操作步骤

1、鸡卵粘蛋白的制备

2、Sephadex-G75的活化及偶联

2.5g干重的葡聚糖凝胶Sephadex-G75溶胀洗涤数次，缓慢搅拌，加入0.05M NaCL溶液50ml ,30min，蒸馏水洗涤数次，抽干备用，活化凝胶，纯化的鸡卵粘蛋白87.5mg 溶于35ml水，加入活化葡聚糖凝胶，75％K2CO3，调pH7.5-9.0,缓慢搅拌3h。反应过程随时加入5％K2CO3,以维持pH的稳定。0.27gKBH4 溶于20ml水，缓慢搅拌加入上述体系反应5h，pH维持在6.5-7.5，洗涤。

3、胰蛋白酶的亲和层析

卵类粘蛋白在pH7－8的条件下能与胰蛋白酶专一地结合，而在pH2－3时又能解离，因而掌握好上柱地PH条件和洗脱缓冲条件，便可将胰蛋白酶从含杂蛋白地粗酶液中选择性地结合于柱上，待洗去不结合或非专一性结合地杂蛋白后，改变PH值便可将胰蛋白酶洗脱下来。从而达到纯化地目的。由于亲和层析结合地专一性，上柱体积可以比较大，得到浓缩的提纯产品。

(1)亲和层析

将鸡卵粘蛋白－Sephadex-G75装柱（1×10cm）,用pH7.5,0.1M含 0.5M KCL,0.05M CaCL2的缓冲液平衡，平衡约2－3倍的柱体积。将粗胰酶液上柱层析。用紫外蛋白监测仪280nm处检测蛋白质吸收峰，随着上柱和流出的杂蛋白量的平衡，吸收峰达到稳定，一旦上柱的胰蛋白酶量超过柱的负荷时，则胰蛋白酶溢出，使吸收峰升高，此时应停止样品上样，改用pH7.5的平衡缓冲液冲洗出杂蛋白，待洗出液的吸收回到基线后，改用0.1N的甲酸钾0.5M KCL,Ph2.5的洗脱液解析，柱的流速维持在1.5ml/min左右，收集洗脱下来的蛋白峰蛋白，测总蛋白量及比活性，并根据上柱样品的总蛋白量和比活性计算经亲和层析后胰蛋白酶比活性提高的倍数，总蛋白回收率，胰蛋白酶量。

当胰蛋白酶峰洗出，待紫外吸收回到基线后，重新用缓冲液平衡，亲和层析柱可以反复使用。

（2）胰酶蛋白和活性测定

实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定

一、实验目的与原理

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。

本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。

二、仪器与试剂

1．材料：

硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。

2．试剂：

（1）丙稀酰胺(Acr母液)：30％Acr （Acr/Bis）

（2）10％的SDS溶液

（3）10％的过硫酸铵溶液

（4）四甲基乙二胺（TEMED）

（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris,PH8.8

（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris,PH6.8

（7）电极缓冲液：10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml,pH8.3

（8）样品缓冲液：0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰

（9）染色液：0.15％考马斯亮蓝R250，溶于脱色液

（10）脱色液：50％的甲醇，7％的冰醋酸的水溶液

（11）标准分子量蛋白。

3．仪器设备：

电泳仪，垂直电泳槽等。

三、操作步骤

1, 凝胶制备：

用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液，倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。

2, 上样：

分别取样品若干ml于离心管中，按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3－5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2－3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1－2cm时，即可停止电泳。

3, 染色：

电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。

四、结果 （略）

五、注意事项

1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。

2、用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。

3、有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。

4、有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。

5、如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。

等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点

一、原理

等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。

在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.

二、仪器与试剂

1．材料：蛋白样品

2．试剂：

聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100

电极液：1M磷酸（阳极液）、1M氢氧化钠（阴极液）

固定液：100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml，定容为1000ml

染色液：0.35g考马斯亮蓝R－150溶于300ml脱色液中，加热到60－70℃，加入0.3g硫酸铜。

脱色液：25％乙醇、8％冰乙酸溶于水

样品缓冲液:1％Ampholine 、2％Triton X-100、9M尿素

三、操作步骤：

1, 样品制备：

用IEF样品缓冲液提取待分析样品，如其他缓冲液提取的样品则应透析后，冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后，离心去除不溶杂质。

2,制模具：

洗干净两块IEF专用玻璃板，进行硅化和反硅化处理，两块玻璃板的硅化和反硅化面相对，放上夹条，夹子夹好。

3, 配胶：

胶液组成：6ml胶母液（10％，19/1）

6－8％尿素

1ml Ampholine (pH3.5-10)

60-80ul 10%AP

5 ul TEMED

4, 灌胶：配好的胶迅速灌入模具

5, 电泳：

等胶凝固后，小心揭去上下玻璃板，将塑料垫片底部擦干，小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片，在纸片上加样，盖上盖子，横功率25W电泳，约10min后，暂停电泳，取下纸片，继续电泳约30min，待电流达4mA以下，停止电泳。

6, 表面电极测定蛋白质的pI

7, 固定：取出塑料片，放入固定液中15min

8, 染色：取出塑料片放入染色液中65℃染色，直至条带出现

9, 可脱色至背景消除后干燥保存。

四、结果 （略）

五、注意事项

1、两性电解质是等电聚焦的关键试剂，它的含量2％-3％较合适，能形成较好的pH梯度。

2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。

3、 过硫酸铵一定要新配置。

4、 所有水用重蒸水。

5、样品必须无离子，否则电泳时样品带可能走歪，拖带或根本不成带。

6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄，当电流稳定在8mA，电压上升到550V 以上，由于阴极飘移，造成局部电流过大，胶承受不了而被烧断。

电致发光光谱原理及用什么仪器检测?

电致化学发光检测仪应用领域: 药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸检测分析

蛋白质与药物、核酸相互作用研究。

荧光分光光度计能测定：FS-2型FS-2型荧光分光光度计

荧光是荧光分子受到较短波长光的激发而发出较长波长荧光的一种现象。荧光激发光谱反映了激发波长和荧光强度的关系；荧光发射光谱反映了发射波长和荧光强度的关系。

相对于其他光学检测器，荧光检测器具有如下三个优点：高灵敏度，快速，安全。安全是指在测量过程中样品不会受到影响或者破坏，同时也没有危险的副产物生成。

灵敏度是一个重要的技术指标，因为荧光的强度和被测物质的浓度成一定的比例而细胞中离子浓度的很小的改变都会产生重大的生理影响。因此吸光光度法能够检测到几个十分之一微摩尔的物质而荧光光度法可以准确测量吸光光度法百万分之一(皮摩尔或者飞摩尔)的物质，数量级可达到10-18摩尔。利用荧光技术，可以测量物质浓度的快速变化，可以测量皮秒内的荧光强度的变化。

因为荧光技术是一种安全的技术，所以荧光不会对样品造成影响。激发光要求产生荧光强度要低并且要减少光源的影响并且生物物质可以在不受外来影响的自然生理条件下测量。

FluoroMate FS-2的构造

FluoroMate FS-2是由光源，激发和发射单色器和检测器，样品测量部分。150W的氙灯提供200-900NM的光源。光在样品前部被分光器分成两部分，一束光照射样品后通过光电二极管来检测激发能量。发射光在通过单色器后被PMT检测器检测，为了放大信号，我们使用了光电倍增管（PMT）检测器。

应用：

FluoroMate FS-2是高性能和高精确度的仪器，可以广泛应用到如下领域：

1． 生命科学

基础生物反应研究，低体积样品的测量，偏振现象和各向异性的研究

2． 医药和医学

痕量水平抗生素的测量，核酸，蛋白和病毒的结构分析

3． 分析化学

荧光物质的鉴别和测量，溶剂效应，光子产率和寿命，化学反应

4． 环境领域

空气，水，土壤中的有机和无机氧化物的鉴别和测量

5． 工业

食品中的营养物质量；油漆，聚合物，光学增白剂和荧光涂料；原油质量

6． 光化学

激发状态的表征，胶束结构，胶团的反应动力学。

技术参数

1.光源: 150W 氙灯

2.波长范围: 200 nm-900nm

3.灵敏度：S/N500(峰对峰)

4.光栅: 1200grooves/250 nm blazing

5.波长扫描速度: 最大5000 nm/min

6.波长驱动器速度: 10,000 nm/min

7.波长精确度:+ 2 nm

8.波长重复性:+ 2 nm

9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm

10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H)

11.重量: 43.7kg

12.电源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz（可选）

PCR实验室主要仪器设备和耗材清单

PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域，每个区域所用的设备不同，下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备？

样品制备区：

生物安全柜 ：防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散

样本低温冰箱：零下20摄氏度，-80℃ 保存样本及DNA

高速台式冷冻离心机：收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境

水浴锅或者金属浴：用于DNA杂交过程中水浴控温

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

混匀仪：移取样本前需要混匀

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

低温摇床：用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养

磁力搅拌器：加速溶解固体内容物

核酸扩散区：

基因扩增仪：基因检测DNA/RNA扩增

荧光定量PCR仪：核酸定量分析

核酸提取仪：样品DNA/RNA提取

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

纯水装置：用于PCR,DNA测序需要超纯水

产物分析区：

电泳仪：水平电泳用于核酸DNA/RNA检测，垂直电泳用于蛋白检测，转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测

凝胶成像系统/紫外检测仪：用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照；紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察，不能连接电脑

电炉：电泳琼脂凝胶加热融化

关于本次核酸蛋白检测仪和自测试剂盒怎么用的问题分享到这里就结束了，如果解决了您的问题，我们非常高兴。