戴斯蒙德·迈尔斯是一名酒吧招待，被Abstergo工业绑架，将他作为Animus中的实验体。Animus是一台可以模拟基因记忆的设备，Abstergo计划将戴斯蒙德放进这台设备中来让他回忆起他的祖先——阿泰尔·伊本-拉阿哈德的记忆。1191年，阿泰尔是一位生活在圣地的刺客兄弟会成员，活跃于第三次十字军东征时期。起初，戴斯蒙德很难适应这台设备，但是终于，他在接下来的数天里重温了阿泰尔的英雄事迹。游戏主要采用了阿泰尔的视角，有时会因为Animus的故障，或者是出血效应的发作而切换回戴斯蒙德的视角。
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